- Pasteurización
Colocar el sustrato en bolsas de polipropileno en un autoclave, someterla a una temperatura de 80ºC por un periodo de 45 minutos, escurrir, la humedad debe ser de 80%.
- Preparación de la semilla utilizando granos de trigo
Luego de obtener la semilla ésta se prepara utilizando granos de cereal (trigo, millo, cebada, sorgo o arroz). El procedimiento es como se describe a continuación:
- Lavar el cereal con agua para quitar todas las impurezas, se debe hidratarlo durante 24 horas, se escurre el exceso de agua y se coloca a orear extendiéndolo sobre una superficie limpia durante 45 minutos. Envasar 300 g de trigo en frascos de vidrio de boca ancha de 14.5 x 7.0 cm de diámetro, previamente esterilizados (Horno Pasteur a 150º C durante una hora), colocando trigo hasta las tres cuartas partes, dejando un espacio para la aireación. Tapar con papel de aluminio.
- Esterilizar los frascos en autoclave a 121º C y 15 lbs de presión durante 40 minutos. Dejar enfriar a temperatura ambiente.
Los frascos se inoculan asépticamente con el hongo a cultivar, de la siguiente manera:
- Los frascos se colocan en la cámara de flujo laminar. La caja de agar malta con el micelio del hongo previamente preparado, se divide en cuadros de 1 cm de lado.
- Colocar un cuadro con la ayuda de un estilete o de una aguja de inoculación, en cada una de los frascos con el grano de trigo estéril. Incubar los frascos entre 28 º C y 30º C bajo oscuridad hasta que el micelio cubra totalmente los granos.
- Guardar los frascos en nevera a 4ºC en bolsas oscuras para evitar fructificación.
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